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ISSN : 1598-5504(Print)
ISSN : 2383-8272(Online)
Journal of Agriculture & Life Science Vol.52 No.5 pp.91-100
DOI : https://doi.org/10.14397/jals.2018.52.5.91

Establishment of the Male Menopause Animal Model Using Rats

Lee Su Jung1,Kwon Gyoo Taik1,Choi Hye Ran1,Gim Sung Woong1,Choi Do Hyun2,Kong Hyun Seok2,Kwon Ji Woong1,Shin Daekeun1,Lee Sang Jin2*
1Berry & Biofood Research Institute, Gochang, 51417, Korea
2Department of Animal Biotechnology & Resources, Sahm Yook University, Seoul, 01795, Korea
E-mail: Leesj@syu.ac.kr
*Corresponding author: Lee Sang Jin
Tel: +82-2-3399-1751
Fax: +82-2-3399-1762
March 2, 2018 August 10, 2018 September 5, 2018

Abstract


The level of testosterone in the blood decreases in males with age, resulting in menopausal symptoms. As the rat reproductive system is very similar to humans, the rats(Ratus norvegicus) commonly used in scientific studies, have been domesticated for more than one hundred years. Therefore, in order to establish an animal model of male menopause, this study was conducted to obtain data on the changes in major hormones and biochemical changes, including testosterone and weight changes in reproductive organs in the two groups of 22 and 50 weeks old rats. The weights of body and reproductive organs were greater at 50 weeks of age than at 22 weeks of age. However, DHT level in serum was higher at 22 weeks than at 50 weeks. In addition, significant increase in AST, ALP, total protein, triglyceride and total cholesterol levels was detected at 50 weeks. The levels of testosterone, LH and sperm concentration and motilitywereremarkably decreased in 50 weeks old rats. The serum FSH level did not change between the two groups. Therefore, it appears that 50 weeks old rats are appropriate and eligible as an animal model of male menopause. Further studies are needed to confirm the changes in various factors according to periods of growth through continuous experiments.



랫드를 활용한 남성갱년기 동물모델의 확립

이수정1,권규택1,최혜란1,김성웅1,최도현2,공현석2,권지웅1,신대근1,이상진2*
1(재)베리&바이오식품연구소, 2삼육대학교 동물생명자원학과

초록


성년의 남성은 노화가 진행됨에 따라 혈중 testosterone이 감소 되면서 갱년기증상을 나타낸다. 랫드 (Ratus norvegicus)는 생식 시스템이 인간과 매우 유사하여 실험 모델로 그 활용 빈도가 높은 동물이다. 본 연구에서는 남성갱년기 동물모델 확립을 위해 22주령과 50주령 랫드의 생식 기관 무게, testosterone 을 포함하는 호르몬 및 생화학적 변화에 대한 비교 연구를 진행하였다. 그 결과 22주령에 비해 50주령의 체중 및 생식기관 무게가 높게 측정 되었다. 혈중 dihydrotestosterone(DHT)는 50주령에 비해 22주령에 서 높게 측정되었다. Aspartate aminotransferasel(AST), alanine aminotransferase(ALP), total protein (TP), triglyceride(TG)와 total cholesterol(TC)은 50주령 랫드 그룹에서 유의적으로 증가되었다. 또한, 혈중 luteinizing hormone(LH)는 50주령 랫드 그룹에서 현저히 감소되었으나, follicle stimulating hormone(FSH)는 두 그룹간 차이를 나타내지 않았다. 본 연구의 결과들을 종합할 때 22주령과 50주령 랫드의 비교 실험은 남성갱년기 동물모델 시스템으로 적용 가능할 것으로 판단되며 보다 확고한 남성갱 년기 전용 동물모델 시스템 확립을 위해서는 생육기간에 따른 다양한 인자들에 대한 지속적인 연구가 진행되어야 할 것으로 판단된다.



    서론

    랫드(Ratus norvegicus)는 100년 넘게 과학적 연구를 위해 널리 사용되었으며, 최초로 연구에 사 용된 것은 1856년 부신 적출 효과에 관한 연구였다 (Agate & Zwemer, 1935). Donaldson이 전생애를 랫드 연구에 바친 그의 업적을 기반으로 하여 1990년 부터 랫드가 실험동물로서 중요한 지위를 확보하게 되었다(Bonnie, 1993). 일반적으로 마우스가 종양, 미생물, 약리 및 독성시험 영역에서 많이 사용되고 있는 반면, 랫드는 종양, 내분비, 약리와 영양생리 학 영역에서 다수 이용되고 있으며, 영양이나 대사 생리면에서 볼 때 주요 실험동물들 보다 인간과의 유사성이 높다(Philip & Howard, 2009). 더욱이 랫 드의 성주기가 인간의 월경주기와 유사성이 높아 (Awobajo et al., 2010), 다양한 분야에서 이상적인 동물 모델로 활용되고 있다(Ramesar et al., 2010).

    남성갱년기라는 개념이 처음 의학 사전에 등장하 게 된 것은 1940년대이다(Gray et al., 1991). 남성 성의 특징은 testosterone에 의해 절대적인 영향을 받게 되는데 노화가 진행됨에 따라 testosterone의 분비가 감소함으로써 남성갱년기가 발현된다. 남성 갱년기는 여성갱년기와 달리 나이가 들어감에 따라 testosterone의 농도가 서서히 감소하게 된다. 그 러나 노인이 되더라도 일정 수준의 남성호르몬은 지속적으로 분비됨으로 여성갱년기처럼 증상이 뚜 렷하게 나타나거나 또는 모든 남성에서 균일하게 나타나는 것은 아니다. 따라서, 남성갱년기를 영문 으로 male climacteric 혹은 andropause라 표기하 기도 하며 이외에도 partial androgen deficiency in aging male(PADAM) 이라고도 표기하고 있다 (Nandy et al., 2008).

    남성 생식기관의 발달에 있어 testosterone의 역할은 잘 알려져 있다(Nikolay et al., 2014). 고 환의 leydig cell에서 분비되는 testosterone은 부 고환(epididymis), 정낭(seminal vesicle), 전립선 (prostate) 혹은 음경(penis)을 포함하는 생식기 부속 기관에도 영향을 미친다(Anderson & Clark, 1990; Wilson & Davies, 2007). 랫드의 경우 testosterone 은 발육 기간 동안 생식기관 발달에 직접적으로 영 향을 미치며, 특히 고환의 무게와 크기 그리고 생식 기 부속기관 뿐만 아니라 정세포의 형성에도 중요한 영향을 미친다(Donnell et al., 1994; Sofikitis et al., 1999; Welsh et al., 2009).

    근래 들어 삶의 질 향상과 더불어 수명이 연장됨 에 따라 남성갱년기에 대한 관심과 수요가 높아졌 다. 이러한 관심을 반영하듯 최근 국내에서는 산수 유(Kim et al., 2016a), 민들레 발효추출물(Lee et al., 2016), 호로파와 야관문 복합추출물(Lee et al., 2015)을 이용한 남성갱년기 개선 효과에 대한 연구 들이 진행되어 왔다. 그러나 기 연구된 남성갱년기 관련 연구들은 주로 TM3 cell을 이용하거나 동물 고환 조직에서 분리된 leydig cell 혹은 sertoli cell 을 이용한 연구가 대부분이다(Noh et al., 2012; Kim et al., 2016b).이러한 결과들로 미루어 볼 때, 동물 모델을 통한 남성갱년기 연령의 간접적용 연 구는 매우 미흡한 실정이다. 따라서, 본 연구는 남 성호르몬이 왕성하게 분비되는 인간의 젊은 시기 해당하는 22주령과 갱년기에 해당하는 50주령의 랫 드를 활용하여 두 그룹간의 생식기 및 부속생식기 의 중량 차이, testosterone을 비롯한 호르몬(DHT, LH, FSH) 비교, 정자 수 및 활동성 비교를 통해 22주령과 50주령 랫드에 대한 비교 실험이 남성갱 년기 동물모델로써 활용 될 수 있는 최적의 동물모델 시스템 중 하나임을 확인·제시하고자 실시하였다.

    재료 및 방법

    1 동물사육

    본 실험은 (재)베리&바이오식품연구소 동물실험 윤리위원회의 승인 하의 표준 작업 지침(BBRIIACUC- 17005)에 따라 수행되었다. 본 연구에서는 Sprague-Dawley(SD) 21주령과 49주령 수컷 랫드 를 구입(Samtako Bio Korea, Gyeonggi, KOR.)하 여 1주일 간의 순화기간을 거쳤다. 실험에 사용된 랫드는 그룹당 10마리 씩으로 온도 22℃와 상대습도 50±10% 그리고 조명 시간이 12시간(점등 08:00- 소등 20:00)인 사육환경에서 cage당 1마리씩 배치 하며 관리하였다.동물실험을 위한 식이와 식수는 실 험동물용 고형사료(PURINA, Gyeonggi, KDR. Seoul, Korea)와 필터 및 자외선 살균기로 여과 살균된 정 제수를 자유롭게 섭취하도록 하였다.

    2 혈액채취 및 장기 적출

    부검 시 랫드는 채혈 전 16시간 절식시켰다. 2,2,2- tribromoethanol과 2-methyl-2-butanol을 1:1로 혼합한 다음 1mL/100g씩 복강 투여하여 마취하였 다. 이후 후대정맥에서 혈액을 채취하여 혈액을 실 온에서 약 30분간 방치한 뒤 13,000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리하고 이후 상층액인 혈청만을 분석 에 사용하였다. 채혈이 끝난 후 방혈을 통해 동물 을 희생시키고 좌·우 고환 및 부고환 그리고 전립 선과 음경을 적출한 다음 전자저울을 통해 중량을 기록하였다(양측성 장기는 양측 한번에 측정). 중량 측정 장기에 대해서는 부검시 체중에 대한 상대중 량으로 산출하였다.

    3 생화학적 분석

    분리한 혈청을 이용하여 AST, ALT, ALP, glucose, TG, TC 그리고 TP의 함량은 자동생화학분석기 (AU480 Chemistry Analyzer, BeckmanCoulter, CA, USA)를 이용하여 측정하였다. 각각의 모든 표본은 3번 반복 측정한 다음 평균 값을 취하였다.

    4 호르몬 분석

    각 개체에서 획득한 혈청을 이용하여 testosterone (Abcam, MA, USA), FSH, LH 그리고 DHT (CUSABIO, Wuhan, CHINA)의 분석은 제조사에서 제공되는 방 법으로 분석하였다.

    5 부고환 상체에서의 정자 수 및 활동성 분석

    채취한 부고환 상체는 37℃의 mineral oil 속에 넣은 후 핀셋과 바늘로 정소상체 미부를 압착하여 미부의 정자를 채취하였다. Petri dish를 37℃, 5% CO2 배양기(Forma Co., MA, USA)에 넣어 20분 동 안 1차 정자 액화를 진행하였으며 액화된 정자 2uL를 998uL의 PBS 배양액으로 옮기고 이후 1mL 용액 (2uL 액화된 정자 용액 + 998uL PBS)을 기준으로 정자 수와 운동성 분석을 수행하였다. 액화된 정자 용액은 슬라이드글라스를 통해 위상차현미경(Nikon Co., Japan)에 부착된 Negative 렌즈(100X)로sperm analysis image system(SAIS) 프로그램을 사용하 여 정자의 수와 운동성을 분석 하였다. 이때 슬라이 드글라스는 37℃로 유지되는 가온판 위에서 온도 평 형화를 통해 정자가 받을 수 있는 온도에 대한 충격 을 최대한 감소시켰다.

    6 통계분석

    실험 결과는 평균±표준오차(Mean±SE)의 형태로 나타내었으며 통계분석은 Student’s T-test 방법을 이용하여 p<0.05인 경우 통계적인 유의성이 있는 것으로 판단하였다.

    결과 및 고찰

    1 체중 및 생식기 무게

    22주령과 50주령의 체중 비교는 Fig. 1에 나타 내었다. 22주령의 체중은 371±29g이었고, 50주령 의 체중은 583±25g으로 22주령에 비해 약 1.6배 무거웠다. 고환, 오른쪽 부고환 및 음경의 무게는 Fig. 2(A-C)에 나타내었다. 고환 무게는 22주령이 3.36±0.10g, 50주령이 4.10±0.08g으로 50주령 랫 드의 고환이 무거웠다. 오른쪽 부고환의 무게 또한 50주령 랫드(0.71±0.02g)의 부고환이 22주령 랫드 (0.59±0.02g)에 비해 무거웠다. 음경의 무게도 22주 령 랫드는 0.37±0.01g으로 측정되었고 50주령 랫 드는 0.50±0.01g으로 조사되어 음경의 무게도 50주 령 랫드가 무거운 것으로 측정되었다. 그러나, 체중 대비 각 기관의 무게를 환산했을 때(Fig. 1(D-F)), 고환과 오른쪽 부고환 그리고 음경의 무게는 22주령 의 그룹에서 높게 나타났다. 본 실험에서 나타난 22 주령과 50주령의 체중과 생식기관 및 생식 부속기관 에 대한 중량 차이는 생육기간에 따른 차이로 판단 된다. 본 연구와 유사하게 Nikolay et al.(2014)의 연구 결과도 3일령에서 15일령까지 어린 랫드의 일 령이 증가할수록 고환의 무게가 점차 증가하는 연구 결과를 발표하였다.

    2 생화학 측정

    간은 생체에서 각종 대사를 담당하는 중요 장기 중 하나로 생명 유지에 필수적인 장기이다(Sherif & Mark, 2010). 그러나, 여러 질환이 원인이 되어 간 에 손상을 줄 수 있으므로 다양한 질환들을 감별하기 위해 생화학적 검사들에 대한 종합적인 분석이 필요 하다. 이를 위한 검사 항목들을 묶어 간 기능 검사로 통칭한다(Philip & Johnny, 2012). 주요 검사로는 AST, ALT, ALP, gamma glutamyl transferase (GGT)와 bilirubin 등이 있고, 이외에도 TP, albumin, lactate dehydrogenase와 ammonia 등의 항목을 더 하여 검사하는 경우도 많다. 본 연구에서는 22주령 과 50주령의 AST, ALT, ALP, TP, TG 그리고 TC을 비교 분석 하였고, 그 결과는 Table 1에 나타내었다. AST의 경우 22주령 그룹은 142.70±5.57U/L이었고 50 주령 그룹은 84.82±7.05U/L로 22주령 그룹에 비해 약 41% 감소되었다. ALT는 22주령과 50주령 그룹 간 유의적 차이가 없었다. ALP는 50주령 그룹에서 86.73±4.09U/L로 22주령(153.30±5.10U/L) 그룹보 다 약 43% 감소된 수치를 나타내었다. TP를 측정한 결과, 22주령 그룹은 6.22±0.08g/dL, 50주령 그룹 은 6.65±0.05g/dL로 50주령의 그룹이 높게 측정되 었다. TG는 22주령에서 67.60±7.35mg/dL이었고, 50주령에서는 165.27±24.74mg/dL이었으며 TC은 22주령에서 69.10±2.51mg/dL, 그리고 50주령에서 188.27±15.51mg/dL로 TG와 TC 모두 50주령 그룹 에서 높게 나타났다. 22주령과 50주령 랫드의 혈액 을 통한 생화학적 분석 결과를 통해 노화가 진행됨 에 따라 세포재생력 감소 및 다양한 원인으로 간기 능이 저하되어 혈액 내 콜레스테롤의 함량이 증가되 는 것으로 생각된다. 이는 인간이 나이가 듦에 따라 세포기능 저하 및 동맥경화를 비롯한 심혈관계 질환 의 발생 빈도가 높아지는 맥락과 같은 이치로 생각 된다(Bolton & Rajkumar, 2010; Niemann et al., 2011; Julie & Wang, 2012).

    3 전립선 크기와 DHT level

    DHT은 5α-reductase에 의해 testosterone으로 부터 생성된다(Randall, 1994). 5α-reductase는 분 자 구조에 따라 5α-reductase-I(SDR5A1), 5α- reductase-II(SDR5A2)와 5α-reductase-III(SDR5A3) 로 나뉘며 이중 5α-reductase-II는 전립선, 간, 부 신, 고환, 뇌 등 다양한 기관에서 발현되지만 전립 선에서 우세하게 발현된다(Anderson et al., 1989). 22주령과 50주령의 전립선 크기는 Table 2에, DHT 는 Fig. 3에 나타내었다. 전립선의 크기를 측정했 을 때, 22주령 그룹은 1.09±0.07g이고 50주령 그룹은 1.50±0.04g으로 50주령 랫드의 전립선이 큰 것으로 측정되었다(Table 2). 반면 체중대비 전립선의 무게를 비율로 나타냈을 때 22주령 그룹은 0.27±0.02%, 50주령 그룹은 0.22±0.01%로 50주 령 그룹이 작았다. 또한 혈액 내 DHT 수치를 분석한 결과, 22주령은 3.81±1.44ng/mL, 0.68±0.20ng/mL 로 50주령 그룹에서 유의미한 감소를 나타내었다 (Fig. 3). 이러한 결과는 Nawata et al.(1977)의 연 구에서 나이가 들수록 혈중 DHT가 감소한다는 결과 와 동일 하였고, DHT와 testosterone의 감소 사이 에 상관관계가 있음을 보고하였다. 그러나 이와는 반대로 Belanger et al.(1994)은 나이가 들수록 인 간의 testosterone 수치는 감소하나 DHT의 수치는 일정하게 유지가 되며 이러한 원인에 대해서 나이가 듦에 따라 testosterone의 수치 감소를 보상하기 위 한 5α-reductase의 활성이 증가하는 것으로 보고하 였다.

    4 혈중 total testosterone과 LH level

    시상하부의 gonadotropin releasing hormone (GnRH)은 뇌하수체 전엽에서 FSH와 LH 분비를 촉 진시킨다. 남성에서 LH는 leydig cell에 작용하여 testosterone 생성을 촉진한다(Huang et al., 2001; Nyby, 2008). 노화에 따른 total testosterone과 LH 레벨의 변화를 측정한 결과는 Fig. 3과 같다. 22주령 랫드의 LH는 58.80±20.73pg/mL로 측 정되었고 50주령 랫드는 18.45±5.98pg/mL로 50주령 랫드의 LH가 유의미한 감소를 나타내었 다(Fig. 4A). 혈액 내 total testosterone은 22주 령 그룹에서 3.27±0.41ng/mL이었고 50주령 그룹 에서는 1.04±0.39ng/mL로 22주령 그룹에 비해 약 69% 감소된 수치를 보였다(Fig. 4B). 감소된 total testosterone은 혈중 LH와 밀접한 관계가 있는 것 으로 판단된다. Simpkin et al.(1977)은 노화된 수 컷 랫드의 LH의 감소 원인으로 GnRH와 prolactin 분비 감소를 제시하였다. 이외에도 gonadotropin receptor 발현 감소(Titouras et al., 1979)와 testosterone 자극에 대한 gonadotropin(Miller & Riegle, 1978)의 반응 감수성 감소 또는 GnRH에 대한 뇌하수체 반응 감수성 감소(Bruni et al., 1977)가 LH의 감소 원인으로 보고된 바 있다. 이러 한 결과들은 노화에 따른 뇌-뇌하수체-고환으로 연 결되는 생식시스템의 기능적 감소와 관련성이 있으 며(Simpkins et al.,1977) 더욱이 최근 연구에 따르 면 뇌 자체가 생식 시스템 퇴화 반응을 조절하는 가 장 중요한 부위일 것으로 제안되고 있다.

    5 FSH level과 정자 수 및 활동성

    남성에서 FSH는 고환의 sertoli cell에 작용하 여 정세관 성숙과 정자형성을 촉진한다(Suresh & Gerhard, 2014). 그러나 FSH가 정자 수정능을 유지하는데 필수적이지 않다는 선행연구 결과로써, FSHβ(FSHβKO) 또는 FSH-R(FSHR KO) 녹아웃 마 우스 모델을 이용한 연구 결과가 보고된 바 있다(Kumar et al., 2005; Siegel et al., 2013). 노화에 따른 FSH 변화에 대한 결과는 Fig. 5에 나타내었고, 정 자 수 및 활동성에 대한 분석 결과는 Fig. 6에 나타 내었다. 22주령 랫드의 FSH는 4.60±0.88pg/mL이 었고, 50주령 랫드는 5.42±0.79pg/mL로 50주 령 그룹에서 약간 높은 수치를 나타내었으나, 통 계적 유의성은 없었다(Fig. 5). 반면 정자 수와 활 동성은 22주령과 50주령 사이에서 뚜렷한 차이를 나타내었다(Fig. 6). 정자 수는 22주령의 그룹에서 8.65±1.03mL/106개였으며 50주령 그룹은 5.88± 0.67mL/106개로 유의미한 감소를 나타내었다. 정 자 활동성 역시 22주령 그룹은 80.55±5.68%, 그 리고 50주령 그룹은 43.89±3.77%로 현저한 감소 를 나타내었다. 본 연구에서는 생육기간 즉 노화 가 진행됨에 따라 FSH는 변화가 없었으나 Riegle & Meites(1976)과 Bruni et al.(1977)의 연구 결 과에는 노화된 수컷 랫드에서 혈중 FSH가 감소 됨을 확인하였다. 그러나 Riegle & Meites의 연 구는 4-6주령과 22-30주령을 비교하였고, Bruni 의 연구는 4주령과 21주령의 랫드에 대한 연구 결과인 반면, 본 연구에서는 22주령과 50주령 랫 드에 대한 비교로써, 결과적 차이를 나타내는 것 으로 판단된다. 또한 생육기간이 증가함에 따라 정 자 수와 활동성이 감소되는 결과는 Lucio et al.(2013)을 비롯한 연구 결과와 동일한 결과임을 확인하였다(Parkening et al., 1988; Tanemura et al., 1993; Wang et al., 1993).

    본 연구는 남성갱년기 동물모델에 관한 연구 결 과가 미진한 실정에 따라 갱년기 동물모델 확립 목표에 따른 기초 연구를 진행하였고, 연구에서 확 인 된 50주령 랫드의 신체적·생화학적 결과들은 갱년기 동물모델로써의 적용 가능성 확인에 의미를 두고자 한다. 그러나 50주령 랫드를 갱년기 동물모 델로 적용함에 있어 뇌, 생식조직 분석 및 기타 조 직에 대한 추가 연구가 진행되어져야 함은 물론, 더 나아가 다양한 생육 기간별 랫드를 이용한 신체적· 생화학적 및 조직학적 변화에 대한 연구를 진행함으 로써 보다 명확한 갱년기 동물모델 구축으로의 연구 결과 정립이 진행되어야 할 것으로 판단된다.

    감사의 글

    본 연구는 농림축산식품부 2017년 농촌자원복 합산업화지원사업 향토건강식품명품화사업과 한국 연구재단(No. 2017R1D1A1B03031336) 및 삼육대학 교의 지원을 받아 수행된 연구 결과입니다.

    Figure

    JALS-52-91_F1.gif

    Body weight of two different age Sprague- Dawley rats.

    Measurements were from 22 weeks and 50 weeks of age in male rats. Graphs represent the mean±SE(n=10, *p<0.05).

    Body weight measurement showed significantly increased in 50 weeks of age compared to 22 weeks of age of rat.

    JALS-52-91_F2.gif

    Testis, epididymis and penis weight and relative weight of two different age Sprague-Dawley rats.

    Measured from 22 weeks and 50 weeks of age in male rats(n=10, *p<0.05). Weight of testis, epididymis and penis were increased in 50 weeks of age compared to 22 weeks of age. But relative weight shows decreased in 50 weeks of age compared to 22 weeks of age.

    JALS-52-91_F3.gif

    DHT serum level of two different age Sprague- Dawley rats.

    DHT levels are significantly lower than in 22 weeks of age(*p<0.05, Bars represent mean±SE, n=10).

    JALS-52-91_F4.gif

    LH(A) and total testosterone(B) serum levels(ng/mL) of two different age Sprague-Dawleyrats.

    LH and total testosterone levels were significantly decreased in 50 weeks of age compared to 22 weeks of age(*p<0.05, Bars represent mean±SE, n=10).

    JALS-52-91_F5.gif

    FSH level of two different age Sprague-Dawley rats.

    FSH level in serum are no differences from 22 weeks of age(*p<0.05, Bars represent mean±SE, n=10).

    JALS-52-91_F6.gif

    Comparison of Sperm concentration and motility of two different age SD rats.

    Sperm concentration and motility were significantly decreased in 50 weeks of age compared to 22 weeks of age group(*p<0.05, Bars represent mean±SE, n=10).

    Table

    Biochemical analysis of two different age Sprague-Dawley rats blood

    Prostate weight of two different age Sprague- Dawley rats

    Reference

    1. AgateFJ Jr and ZwemerRL . 1935. Some factors affecting adrenal insufficiency in the rat . Am. J. physiol.111: 1-8.
    2. AndersonCA and ClarkRL . 1990. External genitalia of the rat: Normal development and the histogenesis of 5a-reductase inhibitor-induced abnormalities . Teratol.42: 483-496.
    3. AnderssonS , BishopRW and RussellDW . 1989. Expression, cloning and regulation of steroid 5areductase, an enzyme essential for male sexual differentiation . J. Biological. Chem.264: 16249-16255.
    4. AwobajoF , RajiY and AkinloyeAK . 2010. Histomorphometric changes in the testis andepididymis of wister strain albino rats following fourteen days oral administration of therapeutic doses of some antibiotics . Int. J. Morphol.28: 1281-1287.
    5. BelangerA , CandasB , DupontA , CusanL , DiamondP , GomezJL and LabrieF . 1994. Changes in serum concentrations of conjugated and unconjugatedsteroids in 40-to 80-year-old men . J. Clin. Endocrinol. Metab.79: 1086-1090.
    6. BoltonE and RajkumarC . 2010. The ageing cardiovascular system . Rev. Clinical. Gerontol.21: 99-109.
    7. BonnieTC . 1993. The wistar rat as a right choice: establishing mammalian standards and the ideal of a standardized mammal . J. Hist. Biol.26: 329-349.
    8. BruniJF , HuangHH , MarshallS and MeitesJ . 1977. Effects of single and multiple injections of syntheticGnRH on serum LH, FSH and testosterone in young and old male rats . Biol. Reprod.17: 309-312.
    9. DonnellLO , McLachlanRI , WrefordNG and RobertsonDM . 1994. Testosterone promotes the conversion of round spermatids between stages VII-VIII of the rat spermatogenic cycle . Endocrinol.135: 2608-2614.
    10. GrayA , FeldmanHA , McKinlayJB and LongcopeC . 1991. Age, disease, and changing sex hormone levels in middle-aged men: Results of the Massachusetts male aging study . J. Clin. Endocrinol. Metab.73: 1016-1025.
    11. HuangBM , LeuSF , YangHY and NormanRL . 2001. Testosterone effects on luteinizing hormoneand follicle-stimulating hormone responses to gonadotropin-releasing hormone in the mouse . J. Androl.22: 507-513.
    12. Julie Cand and Wang MB. 2012. Aging and atherosclerosis: Mechanisms, functional consequences and potential therapeutics for cellular senescence . Circ. Res.111: 245-259.
    13. KayaZ , SogutE , CayliS , SurenM , AriciS , KaramanS and ErdemirF . 2013. Evaluation of effects of repeated sevoflurane exposure on rat testicular tissue and reproductive hormones . Inhal. Toxicol.25: 192-198.
    14. KimTM , JungHK , JangJH , SimMO , LeeMJ , ChoJH and ChoHW . 2016. Effect of corni fructus on testosterone deficiency syndrome in in vitro and in vivo . Kor. J. Pharmacogn.47: 264-272a.
    15. KimM , ChoiSY , KimSS , KimJS , BooSJ and HurJ . 2016. Function of Korean black ginseng: Improvement of andropause symptoms by a complex extract of black ginseng and fenugreek in TM3 leydig cells and aged rats . J. Ethn. Foods.3: 228-234b.
    16. KumarTR . 2005. What have we learned about gonadotropin function from gonadotropin subunit and receptor knockout mice? . Reprod.130: 293-302.
    17. LeeHS , BaekYS , KimYS and KimHP . 2016. Effect offermented dandelion(Taraxacum coreanum) extract on male climacteric syndrome . J. Life. Sci.26: 1063-1073.
    18. LeeKS , LeeEK , KimSY , KimTH and KimHP . 2015. Effect of a mixed extract of fenugreek seed and Lespedeza cuneata on testosterone deficiency syndrome. Kor . J. Food. Sci.47: 492-498.
    19. LucioRA , Tlachi-L pezJL , EguibarJR and AgmoA . 2013. Sperm count and sperm motility decrease in old rats . Physiol. Behav.17: 73-79.
    20. MillerAE and RiegleGD . 1978. Serum testosterone and testicular response to hCG in young and aged male rats . J. Gerontol.33: 197-203.
    21. NandyPR , SinghDV , MadhusoodananP and SandhuAS . 2008. Male andropause: A myth or reality . Med. J. Armed. Forces. India.64: 244-249.
    22. NawataH , KatoK and IbayashiH . 1977. Age-dependent change of serum 5α-dihydrotesto- sterone and itsreaction to testosterone in man . Endocrinol. Japon.24: 41-45.
    23. NiemannB , ChenY , TeschnerM , LiL , SilberRE and RohrbachS . 2011. Obesity induces signs of premature cardiac aging in younger patients: the role of mitochondria . J. Am. Coll. Cardiol.57: 577-585.
    24. NikolayND , TatjanaVS , TatjanaSK and GalinaTS . 2014. A critical point of male gonad development : Neuroendocrine correlates of accelerated testicular growth in rats during early life . PLoS ONE.9: e93007.
    25. NohYH , KimDH , KimJY , ParkJ , KimOH , HanD , KimWY , KimSS , LeeMY , HeoSH , KimM , LeeWB , JeongY and MyungSC . 2012. Improvement of andropause symptoms by dandelion and rooibos extract complex CRS-10 in aging male . Nutr Res Pract.6: 505-512.
    26. NybyJG . 2008. Reflexive testosterone release: A model system for studying the nongenomic effects of testosterone upon male behavior . Front Neuroendocrinol.29: 199-210.
    27. ParkeningTA , CollinsTJ and AuWW . 1988. Paternal age and its effects on reproduction in C57BL/6Nnia mice . J. Gerontol.43: B79-84.
    28. PhilipH and JohnnyC . 2012. What is the real function of the liver Function tests? Ulster. Med. J.81: 30-36.
    29. PhilipMI and HowardJJ . 2009. Rats! Dis. Model. Mech.2: 206-210.
    30. RamesarS , MackrajI , GathiramP and MoodleyJ . 2010. Sildenafil citrate improves fetal outcomes in pregnant, L-NAME treated, Sprague-Dawley rats . Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol.149: 22-26.
    31. RandallVA . 1994. Role of 5 alpha-reductase in health and disease . Baillieres. Clin. Endocrinol. Metab.8: 405-431.
    32. RiegleGD and MeitesJ . 1976. Effects of aging on LH and prolactin after LHRH, L-dopa, methyldopa, and stress in male rat . Proc. Soc.151: 507-511.
    33. SherifRZ and MarkB . 2010. Liver anatomy . Surg. Clin. North. Am.90: 643-653.
    34. SiegelET , KimHG , NishimotoHK and LaymanLC . 2013. The molecular basis of impaired folliclestimulating hormone action: evidence from human mutations and mouse models . Reprod. Sci.20: 211-233.
    35. SimpkinsJW , MuellerGP , HuangHH and MeitesJ . 1977. Evidence for depressed catecholamine and enhanced serotonin metabolism in aging male rats: possible relation to gonadotropin secretion . Endocrinol.100: 1672-1678.
    36. SofikitisN , OnoK , YamamotoY , PapadopoulosH and MiyagawaI . 1999. Influence of the male reproductive tract on the reproductive potential of round spermatids abnormally released from the seminiferous epithelium . Hum. Reprod.14: 1998-2006.
    37. SureshR and GerhardFW . 2014. Endocrine control of spermatogenesis: Role of FSH and LH/ testosterone . Spermatogenesis.4: e996025.
    38. TanemuraK , KurohmaruM , KuramotoK and HayashiY . 1993. Age-related morphological changes in the testis of the BDF1 mouse . J. Vet. Med. Sci.55: 703-710.
    39. TsitourasPD , KowatchMA and HarmanSM . 1979. Age-related alterations of isolated rat leydig cell function: gonadotropin receptors, adenosine 3 ,5 -monophosphate response, and testosterone secretion . Endocrinol.105: 1400-1405.
    40. WangC , LeungA and Sinha-HikimAP . 1993. Reproductive aging in the male brown-Norway rat: a model for the human . Endocrinol.133: 2773-2781.
    41. WelshM , SharpeRM , WalkerM , SmithLB and SaundersPT . 2009. New insights into the role of androgens in Wolffian duct stabilization in male and female rodents . Endocrinol.150: 2472-2480.
    42. WilsonCA and DaviesDC . 2007. The control of sexual differentiation of the reproductive system and brain . Reprod.133: 331-359.
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