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ISSN : 1598-5504(Print)
ISSN : 2383-8272(Online)
Journal of Agriculture & Life Science Vol.50 No.2 pp.95-105
DOI : https://doi.org/10.14397/jals.2016.50.2.95

Effects of Nitrate-rich Plant Extracts on the in vitro Ruminal Fermentation and Methane Production

Shin Ja Lee1, Su Kyoung Lee2, Min Sung Kim3, Sung Sill Lee1,3*
1Institute of Agriculture and Life Science(University-Centered Labs), Gyeongsang National University, Jinju, 52828, Korea
2Journal of Agriculture & Life Science, Jinju, 52828, Korea
3Division of Applied Life Science, Gyeongsang National University, Jinju, 52828, Korea

† These authors made an equal contribution to this paper.

Corresponding author: Sung Sill Lee +82-55-772-1883+82-55-772-1889lss@gnu.ac.kr
July 30, 2015 October 23, 2015 March 7, 2016

Abstract

This study was conducted to evaluate the effects of nitrate-rich plants extracts on the in vitro rumen fermentation characteristics and rumen methane production. The extracts of nitrate-rich plants, as potato, carrot, chinese cabbage, lettuce and spinach were used in this study. The ruminal fluid was collected from a cannulated Hanwoo cow fed concentrate and timothy in the ratio of 6 to 4. The 20mL of mixture, comparing McDougall’s buffer and rumen fluid in the ratio 2 to 1, was dispensed anaerobically 50mL serum bottles containing 0.3g of timothy substrate and extracts of nitrogen-rich plants. The serum bottles were incubated 39°C for 9, 12, 24, 48 hours. The pH value was decreased by increased incubation times and normal range to 6.31 to 6.96. The dry matter digestibility was significantly(p<0.05) lower in chinese cabbage than in control at 9h incubation time. Ammonia concentration was significantly(p<0.05) lower in potato, chinese cabbage, lettuce than in control and the rumen microbial growth rate was significantly(p<0.05) higher in carrot than in control at 24h incubation time. The concentrations of acetate and propionate was significantly(p<0.05) lower in treatment than in control. The concentration of butyrate was showed a different pattern depending on treatments. Total gas emissions was significantly(p<0.05) lower in chinese cabbage, lettuce, spinach than in control at 12h, 24h incubation time. Methane production was significantly(p<0.05) lower in potato, chinese cabbage, spinach than in control, carbon dioxide production was significantly(p<0.05) lower in treatment than in control. In conclusion, supplementation of the nitrate-rich plant extracts in ruminal fermentation in vitro resulted in decreasing the methane production without adversely affecting the fermentation characteristics. Particularly the chinese cabbage extract was regard as a potential candidate for reducing the methane emission in ruminants.


질산염 화합물 함유 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효성상과 메탄 발생에 미치는 영향

이 신자1, 이 수경2, 김 민성3, 이 성실1,3*
1경상대학교 농업생명과학연구원(중점연구소)
2경상대학교 농업생명과학연구원
3경상대학교 응용생명과학부

초록

본 시험은 질산염함유 식물 추출물을 이용하여 in vitro 반추위 발효성상 및 반추위 메탄 발생에 미 치는 영향을 알아보기 위해 수행되었다. 공시재료는 감자, 당근, 배추, 상추 및 시금치 추출물을 사용하 였으며, 발효 기질은 2mm로 분쇄된 timothy 0.3g을 사용하였다. in vitro 실험은 조사료(timothy) 및 배합사료를 6:4의 비율로 급여한 반추위 cannnula가 시술된 한우 암소에서 채취하였다. 반추위액과 McDougall’s buffer를 1:2의 비율로 혼합한 발효액을 0.3g timothy와 식물 추출물이 담긴 50mL serum bottle에 혐기상태로 20mL 분주한 뒤, 39°C에서 9, 12, 24, 48시간 동안 발효하였다. pH는 발 효 시간이 증가함에 따라 점점 감소하며, 6.31~6.96으로 정상범위였다. 건물 소화율은 9시간 배추 추 출물구에서 유의적으로 낮았고, 암모니아 농도는 감자, 배추, 상추 추출물구에서 대조구에 비해 첨가구 에서 유의적으로(p<0.05) 낮았으며, 반추위 미생물 성장량은 발효 24시간대의 당근 추출물구에서 높았 다(p<0.05). Acetate와 propionate 농도는 대조구에 비해 첨가구에서 유의적으로 낮았으며(p<0.05) butyrate 농도는 첨가구간에 발효시간별로 각각 다른 양상을 보였다. 총 가스 발생량은 발효 12시간 및 24시간대에서 배추, 상추, 시금치 추출물구에서 유의적으로(p<0.05) 낮았으며, 메탄 발생량은 감자, 배 추, 시금치 추출물구가 대조구에 비해 유의적으로(p<0.05) 낮았고, 이산화탄소 발생량 또한 첨가구에 비해 대조구에서 유의적으로(p<0.05) 낮았다. 결과적으로 본 시험에 사용된 5종의 질산염 함유 식물 추 출물은 반추위 발효에 악영향을 미치지 않으면서 메탄저감 효과를 나타내었다. 특히 배추 추출물은 반 추위내 메탄발생을 저감시킬 수 있는 식물추출물로서 가능성이 높은 것으로 사료된다.


    Ministry of Education
    National Research Foundation
    NRF-2015R1A6A1A03031413

    서론

    급속한 산업 발전으로 인해 세계는 지금 기후 변 화와 같은 환경위기와 고유가로 대표되는 자원위기 에 직면해 있다. 여러 나라에서 탄소배출 저감과 에 너지 효율화를 위해 저탄소 녹색 성장을 역점적으로 추진하고 있는 상황이다. 메탄은 이산화탄소 다음으 로 지구온난화에 큰 영향을 미치는 온실가스로 지구 온난화에 미치는 영향력(Steinfeld et al., 2006)이 이산화탄소보다 21배가량 높은 것으로 알려져 있다 (IPCC, 2007). 메탄발생 요인 중 특히, 동물 장내 발효에 의해 배출되는 메탄의 양은 지구상에서 발생 하는 총 메탄의 약 16%를 차지하고 있으며(Johnson & Johnson, 1995), 반추동물이 생산하는 메탄 배출 량 중 75%는 소에 의한 것이다(Crutzen et al., 1986). 반추위 내에서 발생되는 메탄은 혐기발효 과 정에서 메탄생성균에 의해 발생된다. 메탄은 반추위 메탄생성균의 섬유소 발효 과정에서 생성되는 분해 산물로 섭취한 사료 에너지의 2~15%가 이용되지 못 하고 트림이나 방귀의 형태로 대기 중에 방출되어 에너지 손실을 가져오며 지구온난화에 많은 영향을 미친다. 이러한 이유로 현재 세계 여러 나라에서는 반추위 미생물에 의해 생산되는 메탄을 줄이기 위한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 반추위 내의 혐기 발효과정을 통해 수소가 생성되는데 이 수소는 반추 위 내의 발효과정 및 반추위 미생물의 효율적인 성 장을 위해 반드시 제거되어야 한다(Immig, 1996). 반추위 내 혐기성 발효과정에서 생성되는 수소를 메 탄생성균이 처리하게 되며(Beauchemin et al., 2008)이 과정에서 메탄이 발생하는 것이다. 반추동 물에서 발생되는 메탄을 줄이기 위한 한 가지 전략 으로는 생성된 수소를 반추동물에게 유용한 물질을 만드는 반응에 쓰이게 하는 것이다. 예를 들면, 프 로피온산 생성을 촉진하는 사료 첨가제를 이용하거 나, 반추위내 acetogenesis 환원 박테리아를 도입하 는 것이다(Joblin, 1999; Molano et al., 2008). 그 러나 반추동물에게 프로피온산 전구체(malate, fumarate)를 급여하였을 때, 메탄생성반응에 미치 는 영향은 변동적이며(Beauchemin & McGinn, 2006; Wallace et al., 2006; Foley et al., 2009), acetogenic bacteria를 반추위 내에 도입한 결과, 메탄생성 고세균과의 수소 경쟁에서 낮은 친연성을 보였기 때문에 실패하였다(Le Van et al., 1998; Ellis et al., 2008). 반추위내 메탄발생저감은 질산 염 환원반응이 이산화탄소 환원반응보다 더 유리하 며, 반추위내에 존재하는 질산염은 메탄생성반응으 로부터 다시 보내진 수소를 이용하여 질산염 환원반 응이 일어나게 되며, 결국 메탄생성이 감소하게 된 다(Allison & Reddy, 1984). VanZijderveld et al.(2010)에 의하면, 4주간의 적응기간을 두고 면양 에게 질산염을 투여한 결과, 메탄의 발생량이 32% 감소하였다고 보고하였으며, 질산염을 투여하였을 때 나타나는 methemoglobin 혈증은 관찰되지 않았 다고 하였다. 이와 동일하게 Nolan et al.(2010)의 연구에 의하면, 면양에게 18일간의 적응기간을 두고 질산염을 투여하였을 때, 메탄 발생량이 약 23% 감 소하였으며 역시 methemoglobin 혈증은 관찰되지 않았다고 보고하였다. 따라서 본 연구는 질산염을 함유하는 식물 추출물이 반추위 내 발효성상 및 메 탄 발생에 미치는 영향을 알아보고자 실험을 실시하 였다.

    재료 및 방법

    1공시축 및 사양관리

    국립 경상대학교 야생동물보호센터에서 사육중인 반추위 Cannula가 장착된 한우(체중 450kg±30kg) 로부터 in vitro 반추위 발효 시험을 위한 시험용 위액을 채취하였다. 공시동물의 사료는 농후사료와 조사료(Timothy)를 40:60으로 하여 체중의 2%를 1 일 2회(09시 및 17시) 분할 급여하였고, 물과 미네 랄 블록은 자유섭취토록 하였다.

    2식물추출물 및 in vitro 시험설계

    공시재료로 식물추출물 5종(Table 1)은 한국식물 추출물은행에서 Methyl alcohol 99.9%로 추출한 것 을 분양 받아 Dimethyl sulfoxide(Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, Mo, USA) 1mL에 희석 후 사용하였다. 기질은 65℃ Dry oven에서 24시간 건조시킨 Timothy를 2mm screen으로 분쇄 한 후 3cmx3.5cm 크기로 자체 제작한 Nylon bag(Ankom Forage bag: R1020)에 넣어 Heat sealing하여 in vitro 실험에 사용하였다. AOAC법(2012)으로 분석 한 Timothy의 화학적 조성 결과는 Table 2과 같다. 시험용 위액 준비는 오전 사료 급여 시간 전에 반추 위에 장착된 Cannula를 통하여 채취하였고, 4겹의 Cheese cloth에 걸러서 O2-free-N2가 충진 된 보 온용기에 담아 실험실로 운반하였다. 잔여 사료 입 자를 제거하기 위해 2겹의 Cheese cloth로 다시 걸 러낸 반추위액과 McDougall’s buffer(1948; Table 3)를 1:2의 비율로 혼합한 발효액을 0.3g Timothy 와 식물 추출물(기질의 5% v/w)이 담긴 50mL Serum bottle에 혐기상태(O2-free-N2)로 20mL를 분주하고, Butyl rubber stopper와 Aluminum cap으로 밀봉하였다. 각 처리구별 발효는 39℃의 Shaking incubator(Jeio Tech, SI-900R, Daejeon, Korea; 120rpm)에서 시간대별(9, 12, 24 및 48h) 로 3반복으로 수행하였다.

    3조사 항목 및 조사 방법

    3.1pH

    가스 발생량 측정 및 가스 포집 후 Weaton decapper(Weaton Co., USA)를 이용하여 Serum bottle의 Aluminum cap 및 Butyl rubber를 제거 한 후, 발효액의 pH를 pH meter(Mettler Toledo, MP230, Columbus, Ohio, USA)를 이용하여 측정 하였다.

    3.2건물 소화율

    발효 상등액 채취 후 Nylon bag을 수거하여 물을 채운 수조에 넣고 Heidolphs Rotamax 120(Heidolph Instrument, Schwabach, BY, Germany)를 이용하 여 100rpm으로 30분씩 2회 씻은 후 65℃의 Dry oven(Jeio tech, Daejeon, Korea)에서 약 24시간 건조시켜 건물 잔량을 측정하였다. 건물 소화율은 투입한 기질량과의 차이를 구하고 이 차이를 투입한 기질량의 백분율로 환산하여 구하였다.

    3.3미생물 성장량

    pH 측정 후, 발효액을 1.5mL E-tube에 채취하 여 사료입자를 제거하기 위해 3,000rpm에서 3분간 원심분리 하였다. 상등액을 취하여 14,000rpm에서 3분간 재 원심분리하여 미생물 Pellet을 침전시킨 후, 상등액은 제거하고 Pellet에 Sodium phosphate buffer(pH 6.5)를 1mL 첨가하여 Vortex로 교반시 키는 세척 과정을 3회 반복 후 Spectrophotometer (BIO-RAD, Model 680, Contra Costa, CA, USA) 를 이용하여 550nm에서 O.D.(Optical density) 값 을 구하여 미생물 성장량을 측정하였다.

    3.4암모니아

    Chaney & Marbach(1962)의 방법에 따라 Phenol color reagent와 Alkali-hypochlorite reagent로 발효액의 암모니아를 발색한 후 Spectrophotometer (BIO-RAD Model 680, Contra Costa, CA, USA) 를 이용하여 630nm에서 O.D(Optical density) 값 을 구하여 측정하였다.

    3.5휘발성지방산(VFA)

    발효액을 1.5mL E-tube에 채취하여 3,000rpm에 서 3분간 원심 분리하여 사료입자를 제거하고, 상등 액을 0.20㎛ Syringe filter로 여과 후 HPLC(High Performance Liquid Chromatography, Agilent- 1200, Germany)를 이용하여 분석하였다. 시료의 주입량은 20㎕였고, 이동상 용액은 0.0085N H2SO4 을 사용하였으며, 유속은 0.6mL/min이었다. Column 은 300mm×7.8mm I.d. MetaCarb 87H(Varian, Palo Alto, San Francisco, CA, USA)를 사용하였 으며, Column 온도는 35℃에서 사용하였다.

    3.6총 가스, 이산화탄소 및 메탄 발생량

    Serum bottle을 Shaking incubator에서 꺼낸 후, Theodorou et al.(1994)의 방법으로 Serum bottle 의 Head space에 있는 가스 발생량을 Detachable pressure transducer 및 Digital read-out voltmeter (Laurel Electronics, Inc., CA, USA)를 사용하여 측정하였고, 9mL 진공시험관(Vaccutainer)에 가스 를 포집하여 GC(HP 5890 Gas Chromatography, Wilmington, Delaware, USA)를 사용하여 가스 내 메탄 함량 및 이산화탄소 함량을 측정하였다.

    4통계처리

    통계처리는 SAS package program(1996)의 General Linear Model(GLM) procedure에 따라 처 리하였으며, 각 처리구간의 유의성 검증을 위해 분 산분석을 실시 후, Duncan’s multiple range test(Duncan, 1955)로 5% 수준에서 유의성을 검정 하였다.

    결과 및 고찰

    1발효성상 및 미생물 성장량

    질산염 함유 식물 추출물을 첨가한 in vitro 실험 에서 발효시간대에 따른 발효성상 및 미생물 성장량 은 Table 4과 같다. 반추위내 pH는 발효시간이 경 과함에 따라 감소하고 있으며, 본 실험에서 pH 범 위는 6.31~6.96으로 정상 범위인 5.0~7.8을 유지 하였다(Ha et al., 2005). 발효초기인 9시간과 12시 간에는 상추와 시금치 추출물을 제외하고 전 처리구 에서 대조구에 비해 유의적으로 낮거나(p<0.05) 같 았고, 48시간에는 배추 추출물을 제외하고 대조구가 처리구에 비해 유의적으로 낮거나(p<0.05) 같았으 며, 발효 24시간은 처리구와 대조구가 차이가 없었 다. 질산염이 환원하는 과정에서 pH는 중요한 요인 중 하나로 꼽히며, 각종 중독을 일으키는 아질산염 환원은 pH 5.6으로 질산염 환원(pH 6.5)과 NH2OH 의 환원(pH 6.0~7.0)보다 낮다. 그래서 질산염이 많이 포함된 조사료를 급여할 때에는 농후사료를 같 이 급여하여 반추위내 pH를 떨어뜨려 아질산염의 축적과 혈중 methemoglobin 생성되는 것을 막는 다(Miyazaki et al., 1974). 본 실험에서는 아질산 염이 환원될 만큼 pH가 낮진 않으나, 실험에 사용 한 추출물은 천연 물질인 식물유래 성분이고, 추출 물 농도가 기질의 5% 밖에 들어가지 않았기 때문 에 in vitro 발효 성상에는 큰 문제가 없을 것으로 생각된다.

    건물 소화율은 발효 9시간대의 배추 추출물구가 타처리구에 비해 유의적(p<0.05)으로 낮았으나 이 후 발효 12, 24, 48시간에는 첨가구와 대조구간에 유의적인 차이가 없었다. 발효 9시간 배추 추출물은 당근이나 시금치 추출물에 비해 수치상 크게 차이가 나지 않았다. 또한, 발효가 진행될수록 대조구와 처 리구에서 유의적 차이가 없는 것으로 보아 질산염 추출물은 건물 소화율에 영향을 미치지 않는 것으로 생각된다.

    암모니아 농도는 발효 9시간과 24시간에는 대조 구와 처리구간에 차이가 없었으나, 발효 12시간에 당근, 배추, 상추 추출물구가 대조구에 비해 유의적 으로 낮았고, 발효 48시간대의 배추 추출물구가 대 조구에 비해 유의적으로 낮았다(p<0.05). 반추위 미 생물에 의해 질산염이 암모니아로 환원되는 과정은 고등식물과 유사하며(Jones, 1972), 환원된 암모니 아를 미생물단백질의 합성에 필요한 질소원으로 사 용함으로써 다른 NPN들과 동일한 효과를 기대할 수 있겠으나, 요소나 암모늄에 비해 영양적 이용 효율 은 낮다(Schlegel, 1981). 반추위 미생물 단백질 합 성을 효율적으로 하기 위한 적정 암모니아 수준은 100ml당 5~8mg 수준(Allison, 1969; Sarter & Slyter, 1974; Stern & Hoover, 1979)이지만, 본 시험에서는 적정 수준보다 훨씬 낮았다.

    미생물 성장량은 발효 24시간대의 당근 첨가구 에서 대조구에 비해 유의적(p <.05)으로 높았으 나, 다른 발효 시간에서는 첨가구와 대조구간에는 차이가 없었다. 특정 미생물은 적절한 영양소를 포 함한 사료를 공급 받으면 그 수가 증가하고, 질산 염 환원에 필요한 에너지를 공급하는데, 이 에너지 는 질산염과 아질산염의 분해를 활발히하여 혈중 methemoglobin의 형성이 억제된다(Miyazaki et al., 1974). 발효 24시간 대에서 첨가구와 대조구 간 유의점(p<0.05)인 차이가 있었으나, 다른 발효 구간에서는 대조구와 첨가구간의 유의점(p<0.05)인 차이가 없었다. 따라서 질산염 함유 추출물은 미생 물 성장량에 영향을 미치지 않는 것으로 사료된다.

    2휘발성지방산(VFA)

    질산염 함유 식물 추출물을 첨가한 in vitro 실험 에서 발효시간대에 따른 acetate(A), propionate(P), butyrate 및 A/P 비율은 Table 5와 같다. Acetate 농도는 모든 발효 시간에서 대조구에 비해 첨가구 에서 유의적으로 낮았으며, propionate 농도는 발 효 9시간과 12시간에는 차이가 없었으나 발효 24시 간과 48시간대에는 첨가구가 대조구에 비해 유의적 (p<0.05)으로 낮았다. Butyrate 농도는 발효시간별 로 각기 다른 패턴을 보였고, A/P 비율은 발효 24 시간대의 당근구에서 유의적(p<0.05)으로 높았으나 다른 구간에는 차이가 없었다. Farra & Satter (1970)에 의하면 질산염은 acetate의 생성비율을 증 가시키나 상대적으로 butyrate와 protionate의 생성 비율은 감소시킨다고 하였으며, Marais et al. (1988)은 질산염은 섬유소 분해 박테리아의 성장을 선택적으로 억제하여 acetate의 생성비율을 감소시 킨다고 한다. Alaboudi & Jones(1985)은 과량의 질산염을 섭취하였을 때, butyrate의 농도가 총 VFA의 1%대 수준으로 감소하여 반추위벽으로부터 에너지 이동이 일어나 반추위의 울혈을 일으킨다고 한다.

    Acetate는 반추위 내 수소 농도를 증가시키며, propionate는 반추위 내 수소 농도를 저하시키는 수소 sink작용으로 메탄생성을 억제한다(Jouany & Morgavi, 2007). 본 시험에서는 acetate의 농도가 대조구에 비해 첨가구에서 유의적으로 낮아 메탄생 성의 원료가 되는 수소의 농도가 낮았을 것으로 사 료된다.

    3총 가스, 메탄 및 이산화탄소 발생량

    질산염 함유 식물 추출물을 첨가한 in vitro 실험 에서 발효시간대에 따른 총 가스, 메탄 및 이산화탄 소 발생량은 Table 6과 같다. 가스 발생량은 발효 속도와 관련 있으며, 본 실험에서 발효가 진행될수 록 총 가스 발생량이 증가하였고, 이것은 기질의 분 해와 발효가 진행되었다는 것을 의미한다. 총 가스 발생량은 발효 12시간대와 24시간대에서 배추, 상 추, 시금치 추출물구에서 대조구에 비해 유의적 (p<0.05)으로 낮았다.

    메탄 발생량은 12시간대에 감자, 배추, 시금치 추 출물구가 대조구에 비해 유의적으로 낮았으며, 24시 간대에는 배추 추출물구가 대조구에 비해 유의적으 로 낮았다. 이산화탄소 추출물은 발효 9시간대에서 당근 추출물구를 제외한 모든 첨가구에서 대조구에 비해 유의적으로 낮았으며, 발효 12시간에서는 배추 와 시금치 추출물에서 대조구에 비해 유의적으로 낮 았다(p<0.05).

    기질인 티모시가 분해하면 반추위내 미생물에 의 해 VFA와 이산화탄소 및 수소가 생성되며, 편성 혐 기성 고세균인 메탄생성박테리아에 의해 이산화탄소 와 수소가 결합한 메탄이 생성된다(Ha et al., 2005). 총 가스 발생량과 메탄 발생량은 반추위 발 효 과정에서 수소를 이용하는 hydrogen disposal의 주요 경로이며(Beauchemin et al., 2008), 반추위 발효 과정에서 수소를 제거하면 메탄이 간접적으로 줄어들 수 있기 때문에 에너지 이용측면에서 효율적 이다. 메탄은 지구 온난화에 기여하는 온실가스일 뿐만 아니라 숙주동물의 에너지 손실의 원인이기도 하다. VanZijderveld et al.(2010)에 의하면 질산염 과 황산염을 반추동물인 양에게 각각 급여하였을 때, 질산염만 급여한 첨가구에서 대조구에 비해 유 의적으로 메탄이 줄어들었다고 보고하였다. 이는 질 산염 환원에 약 4몰의 수소는 사용되기 때문에 수소 disposal을 통해 메탄을 억제하기 때문이며, 이론상 으로는 질산염 100g당 25.8g의 메탄을 억제할 수 있다. 이처럼 질산염은 메탄을 억제할 수 있는 잠재 적인 물질이라 생각되며, 질산염이 환원될 때 수소 를 제거하기 때문에 수소sink로서 역할을 할 수 있 을 것으로 사료된다.

    메탄을 간접적으로 억제하는 방법은 기질인 이산 화탄소와 수소를 제거하는 방법이다. 본 시험에서 감자 추출물의 경우 이산화탄소 발생량에는 유의적 차이가 없는 것으로 보아 수소 발생량이 감소하였기 때문이라 생각된다. 결과적으로 본 실험에 사용한 5 종의 질산염 함유 식물 추출물은 반추위 발효에는 영향을 미치지 않으며, 감자, 배추, 시금치 추출물 에서 메탄저감 효과를 나타내었다. 특히, 배추 추출 물구가 다른 첨가구에 비해 메탄 발생량을 현저히 감소시킬 수 있어, 향후 첨가수준별 추가 실험이 필 요할 것으로 판단된다.

    감사의 글

    본 논문은 2015년 정부(교육부)의 재원으로 한국 연구재단의 지원을 받아 수행된 연구(NRF-2015R 1A6A1A03031413)이며, 김민성의 석사학위논문을 이 용하였습니다.

    Figure

    Table

    The information regarding nitrate-rich plant extracts used in the experiment

    Plant extracts were obtained from Plant Extract Bank(PEB) at Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology

    Chemical compositions of experimental feedstuff used as a substrate for the in vitro incubation

    The chemical composition of McDougall buffer

    1)CaCl2 4g(/100mL D.W)

    Effect of nitrate-rich plant extracts on ruminal fermentation characteristics in vitro

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly(p<0.05)

    Effect of nitrate-rich plant extracts on concentrations of VFAs in vitro

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly(p<0.05)

    Effect of nitrate-rich plant extracts on gas production in vitro

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly(p<0.05)

    Reference

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